塑料膜大腸桿菌阻菌測(cè)試方法與應(yīng)用研究

引言

大腸桿菌作為革蘭氏陰性菌的典型代表，其在塑料膜表面的存活與繁殖特性直接關(guān)系到食品包裝、醫(yī)療防護(hù)等領(lǐng)域的衛(wèi)生安全。本文基于ISO 22196:2011和GB/T 31402-2023標(biāo)準(zhǔn)，系統(tǒng)闡述塑料膜大腸桿菌阻菌性能的測(cè)試方法、結(jié)果計(jì)算、影響因素及行業(yè)應(yīng)用，為相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供技術(shù)參考。

一、測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)與方法原理

(一)核心標(biāo)準(zhǔn)體系

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)與中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分別通過(guò)ISO 22196:2011和GB/T 31402-2023確立了塑料表面抗菌性能的測(cè)試框架。兩類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)均明確將大腸桿菌(Escherichia coli)作為必選測(cè)試菌種，其中：

ISO 22196:2011：規(guī)定采用貼膜法(Film Cover Method)評(píng)估非多孔材料表面的抗菌活性，適用于聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)等塑料膜材料。

GB/T 31402-2023：等同采用ISO標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容，補(bǔ)充國(guó)內(nèi)菌株號(hào)(如大腸桿菌ATCC 8739)及培養(yǎng)基制備規(guī)范。

(二)測(cè)試原理

通過(guò)定量比較抗菌塑料膜與對(duì)照樣品(無(wú)抗菌處理)在接種大腸桿菌后的活菌數(shù)變化，計(jì)算抗菌率(AR)或抗菌活性值(R)。其核心原理基于公式：

其中，為對(duì)照樣品的菌落數(shù)(CFU)，為抗菌樣品的菌落數(shù)(CFU)。當(dāng)時(shí)，判定為具有強(qiáng)抗菌效果(對(duì)應(yīng)抗菌率≥99%)。

二、測(cè)試流程與關(guān)鍵參數(shù)

(一)樣品制備

尺寸要求：50mm×50mm的方形試片，厚度≤10mm，每組至少3個(gè)平行樣。

表面處理：

抗菌樣品：確保抗菌劑分布均勻(如涂層厚度偏差≤5%)。

對(duì)照樣品：與測(cè)試樣品材質(zhì)相同但不含抗菌成分。

滅菌處理：75%乙醇擦拭后紫外照射30分鐘，避免殘留消毒劑影響細(xì)菌活性。

(二)菌液制備

菌種活化：將大腸桿菌凍干菌種接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

濃度調(diào)整：用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋至1×10? CFU/mL(OD???≈0.1)，活菌數(shù)通過(guò)平板計(jì)數(shù)法驗(yàn)證。

(三)接種與培養(yǎng)

接種操作：取0.4mL菌液均勻滴加于樣品表面，覆蓋40mm×40mm無(wú)菌PE膜，確保無(wú)氣泡且充分接觸。

培養(yǎng)條件：37℃±1℃、相對(duì)濕度≥90%條件下培養(yǎng)24小時(shí)±1小時(shí)。

(四)結(jié)果回收與計(jì)算

活菌回收：加入10mL含0.85%NaCl和0.1%Tween 80的中和液，振蕩洗脫后梯度稀釋(10?1至10??)。

菌落計(jì)數(shù)：取0.1mL稀釋液涂布營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)48小時(shí)后計(jì)數(shù)，結(jié)果取平行樣平均值。

數(shù)據(jù)有效性：對(duì)照樣品菌落數(shù)需在1×103-1×10? CFU范圍內(nèi)，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。

三、關(guān)鍵影響因素分析

(一)抗菌劑類(lèi)型

銀離子體系：

釋放量需控制在≤0.05mg/L(GB 4806.7-2016)，50次洗滌后抑菌率保持≥90%。

案例：某PE保鮮膜添加2%納米銀，對(duì)大腸桿菌抗菌率達(dá)99.8%，但3個(gè)月儲(chǔ)存后下降至92%。

季銨鹽類(lèi)：

需關(guān)注遷移風(fēng)險(xiǎn)，如醫(yī)療級(jí)PVC膜中季銨鹽遷移量≤0.1mg/kg。

優(yōu)勢(shì)：對(duì)大腸桿菌的24小時(shí)抑菌率可達(dá)99.9%，但長(zhǎng)期熱穩(wěn)定性較差(85℃以上易分解)。

(二)環(huán)境條件

溫度與濕度：

37℃/90%RH條件下抗菌效guo最佳，低溫(4℃)會(huì)導(dǎo)致抗菌率下降15-20%。

加速老化試驗(yàn)(QUV 500h)后，抗菌活性保持率需≥85%(ASTM D4329-13)。

接觸介質(zhì)：

油脂類(lèi)食品模擬液會(huì)加速抗菌劑溶出，導(dǎo)致大腸桿菌抑菌率下降30%(對(duì)比水性介質(zhì))。

(三)材料特性

表面粗糙度：Ra≤0.1μm可減少細(xì)菌藏匿，Ra>0.5μm時(shí)假陽(yáng)性率增加12%。

耐久性：Taber磨耗500轉(zhuǎn)后，抗菌塑料膜對(duì)大腸桿菌的抑制率衰減應(yīng)≤10%。

四、行業(yè)應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)要求

(一)食品接觸材料

檢測(cè)頻率：每批次出廠檢測(cè)，年度型式檢驗(yàn)需包含大腸桿菌項(xiàng)目(GB 4806.7-2016)。

限值要求：

抗菌率≥99%(對(duì)應(yīng)R≥2.0)。

重金屬遷移量：鉛、鎘等總和≤0.01mg/kg。

(二)醫(yī)療防護(hù)領(lǐng)域

滅菌兼容性：環(huán)氧乙烷滅菌后，大腸桿菌抗菌率衰減應(yīng)≤5%。

動(dòng)態(tài)抑菌要求：模擬24個(gè)月儲(chǔ)存后(40℃/90%RH老化28天)，抑菌率仍需≥90%(YY/T 0969-2013)。

五、測(cè)試質(zhì)量控制要點(diǎn)

培養(yǎng)基驗(yàn)證：使用大腸桿菌WDCM 00013菌株驗(yàn)證培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力，回收率需≥0.7.

陰性對(duì)照：確保PE覆蓋膜無(wú)菌，空白平板菌落數(shù)≤1 CFU。

人員操作：需通過(guò)ISO 7218微生物操作認(rèn)證，避免人為污染。

六、典型案例分析

案例1：食品級(jí)PE保鮮膜

測(cè)試條件：添加1.5%銀鋅復(fù)合抗菌劑，按ISO 22196方法測(cè)試。

結(jié)果：大腸桿菌抗菌率99.6%(R=2.4)，50次洗滌后仍達(dá)95.3%，符合GB 4806.7-2016要求。

案例2：醫(yī)用PVC導(dǎo)管膜

挑戰(zhàn)：需同時(shí)滿(mǎn)足抗菌性與生物相容性。

解決方案：采用季銨鹽接枝改性，大腸桿菌抑菌率99.9%，細(xì)胞毒性評(píng)級(jí)1級(jí)(無(wú)溶血反應(yīng))。

七、結(jié)論與展望

塑料膜大腸桿菌阻菌測(cè)試需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，重點(diǎn)控制抗菌劑遷移、環(huán)境因素及材料耐久性。未來(lái)發(fā)展方向包括：

快速檢測(cè)技術(shù)：ATP生物發(fā)光法將檢測(cè)時(shí)間從48小時(shí)縮短至2小時(shí)。

智能監(jiān)測(cè)：開(kāi)發(fā)抗菌性能在線監(jiān)測(cè)傳感器，實(shí)時(shí)預(yù)警大腸桿菌污染風(fēng)險(xiǎn)。

綠色抗菌體系：植物源抗菌劑(如柚皮苷)在塑料膜中的應(yīng)用研究，可減少化學(xué)物質(zhì)遷移。

參考文獻(xiàn)

ISO 22196:2011 Plastics—Measurement of antibacterial activity on plastic surfaces

GB/T 31402-2023 塑料和其他無(wú)孔材料表面抗菌活性的測(cè)定

王某某等. 納米銀抗菌塑料膜的大腸桿菌抑制性能研究[J]. 材料科學(xué)學(xué)報(bào), 2024. 42(3): 45-51.

ASTM D4329-13 塑料加速老化試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法